Минимальная ингибирующая. Минимальная концентрация наркотических средств, психотропных веществ, иных веществ, вызывающих опьянение, в биологическом объекте

Оглавление темы "Методы определения чувствительности к антимикробным средствам. Побочные эффекты антибиотикотерапии.":

Методы определения чувствительности к антимикробным средствам. Минимальная ингибирующая концентрация (МИК). Метод серийных разведений в жидких средах.

Критериями активности того или иного препарата выступают минимальная ингибирующая концентрация (МИК ) - наименьшая концентрация препарата, тормозящая рост тест-культуры и минимальная бактерицидная концентрация (МБК ) - наименьшая концентрация препарата, вызывающая бактерицидный эффект.

Метод серийных разведений в жидких средах

Метод серийных разведений в жидких средах позволяет установить минимальную ингибирующую концентрацию (МИК ) и минимальную бактерицидную концентрацую (МБК ) препарата для выделенного возбудителя. Исследования можно выполнять в различных объёмах питательной среды (1-10 мл). Используют жидкие питательные среды, соответствующие пищевым потребностям возбудителя. В пробирках (обычно восьми) готовят серию двойных разведений препарата на питательной среде. Концентрацию уменьшают соответственно от 128 до 0,06 мкг/мл (базовая концентрация может варьировать в зависимости от активности препарата). Конечный объём среды в каждой пробирке составляет 1 мл. Контролем служит пробирка, содержащая чистую питательную среду. В каждую пробирку вносят по 0,05 мл физиологического раствора, содержащего 106/мл микробных клеток. Пробирки инкубируют 10-18 ч при 37 °С (или до появления бактериального роста в контрольной пробирке). По истечении указанного срока результаты учитывают по изменению оптической плотности среды визуально или нефелометрически. Также можно применять модифицированный метод, используя среду, дополненную глюкозой и индикатором. Рост микроорганизмов сопровождается изменением рН среды и, соответственно, окраски индикатора.

1 «Санкт-Петербургский государственный педиатрический медицинский университет» Минздрава России

Актуальность

В офтальмологической практике выбор антибактериального препарата, как и в остальных случаях проведения противомикробной терапии, зависит в первую очередь от возбудителя и его чувствительности к антибиотикам. Используемый антибактериальный препарат должен обладать бактерицидным действием и иметь низкую минимальную подавляющую концентрацию (МПК). Это особенно важно в современных условиях при постоянно нарастающей резистентности микроорганизмов к антибиотикам. Назначение препарата в дозах, не способных оказать пагубное воздействие на микроорганизм, может способствовать дальнейшему развитию резистентности микрофлоры .

МПК - это та наименьшая концентрация антибактериального препарата, которая вызывает подавление заметного невооруженным глазом роста микрофлоры. Именно МПК позволяет наиболее точно охарактеризовать степень чувствительности микроорганизма к антибиотику . Чем ниже МПК препарата, тем выше чувствительность к нему микрофлоры. Только знание МПК позволяет решить вопрос: достигает ли антибиотик при местном применении зон локализации возбудителя в концентрации достаточной для подавления этого микроорганизма? Следует отметить также, что наиболее широко используемые в офтальмологической практике антибактериальные препараты (фторхинолоны и аминогликозиды) относятся к дозозависимым препаратам , т.е. скорость гибели микроорганизмов возрастает прямо пропорционально их концентрации. В научной литературе имеются данные о более медленном достижении МПК офлоксацина во влаге передней камеры глаза по сравнению с левофлоксацином . Доказано также, что после однократной инстилляции левофлоксацина его концентрация многократно превышает МПК для всех микроорганизмов, вызывающих инфекционные заболевания глаз . Однако в клиническую практику постоянно внедряются новые антибактериальные препараты, а в имеющейся литературе практически отсутствуют сведения о МПК, т.е. об антимикробной эффективности всего имеющегося спектра современных антибиотиков, использующихся в офтальмологии, что и послужило поводом к проведению нашего исследования.

Цель

Определить МПК современных антибиотиков для наиболее часто встречающейся микрофлоры.

Материал и методы

Для определения МПК антибиотиков мы использовали Hi Comb MIC Test (регистрационное удостоверение МЗ РФ 2003/1664 от 23.12.2003 г.). Тест состоит из полосок, к которым прикреплены диски, пропитанные не одной, а целым рядом убывающих концентраций одного и того же антибиотика. При выполнении исследования сначала мы брали содержимое конъюнктивальной полости для посева на простой агар. Далее выделяли чистую культуру микроорганизма и сеяли ее на соответствующую твердую питательную среду в чашке Петри в виде газона. Затем чашки Петри инкубировали в термостате при температуре 37º в течение 24 часов. При этом вокруг тестовых полосок формировалась зона задержки микрофлоры в форме эллипса, позволяющая определить МПК антибактериального препарата. МПК определяли по цифровой шкале на тестовой полоске в области минимального диаметра эллипсовидной зоны задержки роста микрофлоры. Нами определена МПК самых распространенных в клинической практике антибактериальных препаратов - ципрофлоксацина (Ципромед, Sentiss), офлоксацина (Флоксал, Baush &Lomb), левофлоксацина (Сигницеф, Sentiss), моксифлоксацина (Вигамокс, Alcon), гатифлоксацина (Зимар, Allergan) и тобрамицина (Тобрекс, Alcon).

Результаты

Всего обследовано 105 больных в возрасте от 2 мес. до 7 лет с различными воспалительными заболеваниями переднего отдела глаза: острым и хроническим конъюнктивитом, блефароконъюнктивитом, стенозом носослезного протока, осложненным хроническим дакриоциститом, а также бактериальным кератитом. В посевах отделяемого из конъюнктивальной полости детей были обнаружены эпидермальный (43,9%) и золотистый стафилококки (22,9%), стрептококки (15,1%), а также грамотрицательная микрофлора (18,1%).

У всех апробированных антибактериальных препаратов МПК для эпидермального стафилококка оказалась самой высокой. Самой низкой МПК для эпидермального стафилококка оказалась у препаратов левофлоксацин и моксифлоксацин - 0,544 и 0,551 мкг соответственно. Максимальная МПК зафиксирована нами у тобрамицина (8,623 мкг), т.е. этот препарат оказался наименее эффективным в отношении Staphylococcus epidermidis. Несмотря на то, что гатифлоксацин относительно недавно используется в клинической практике, его МПК оказалась достаточно высокой - 1,555 мкг. МПК ципрофлоксацина и офлоксацина была небольшой - 1,023 и 1,191 мкг соответственно.

МПК всех антибактериальных препаратов для золотистого стафилококка оказалась меньшей, чем для эпидермального. При этом самой низкой МПК оказалась у левофлоксацина (0,020 мкг), т.е. для лечения инфекций, вызванных золотистым стафилококком, этот препарат оказался наиболее эффективным. МПК моксифлоксацина (0,202 мкг) и офлоксацина (0,240 мкг) также оказалась небольшой, однако в 10 раз превышала МПК левофлоксацина. Самая высокая МПК зафиксирована нами у препарата тобрамицин (5,115 мкг).

Из конъюнктивальной полости детей были выделены следующие стрептококки: Streptococcus pneumoniae, Streptococcus viridans и Streptococcus haemolyticus. Наименьшая МПК для всех выделенных у детей стрептококков оказалась у моксифлоксацина - всего 0,006 мкг. МПК левофлоксацина была также маленькой, однако значительно превышала МПК моксифлоксацина - 0,135 мкг. Высокая МПК была зафиксирована у ципрофлоксацина (1,246 мкг) и самая большая - у тобрамицина (6,460 мкг).

Группу выделенных у детей грамотрицательных микроорганизмов составили синегнойная палочка, Enterobacter brevis, Klebsiella pneumoniaе, а также Serratia marcencens. Самая низкая МПК для грамотрицательной микрофлоры оказалась у ципрофлоксацина - 0,034 мкг. Низкие показатели МПК, т.е. высокая эффективность, отмечена также у левофлоксацина - 0,051 мкг. МПК офлоксацина и гатифлоксацина была значительно большей и практически одинаковой - 0,096 и 0,102 мкг. Самая высокая МПК снова была зафиксирована у тобрамицина (7,050 мкг).(см.рис.)

Заключение

Таким образом, самым эффективным антибактериальным препаратом в отношении наиболее часто выделяемой у детей микрофлоры оказался левофлоксацин. МПК этого препарата для стрептококков и грамотрицательных микроорганизмов также оказалась небольшой, что позволяет рекомендовать препарат на основе 0,5% левофлоксацина Сигницеф для лечения всех воспалительных заболеваний глаз бактериальной природы.

Для терапии воспалительных заболеваний глаз, вызванных стрептококками, предпочтителен моксифлоксацин, так как его МПК для стрептококков оказалась самой маленькой. МПК ципрофлоксацина для всей грамотрицательной микрофлоры оказалась самой низкой, что подтверждает общепризнанную высокую эффективность этого препарата. Самая высокая МПК для всех выделенных микроорганизмов оказалась у тобрамицина.

Страница источника: 26

В принципе эта процедура сходна с определением МПК в жидкой "Среде. Готовят несколько чашек Петри со ступенчатыми разведениями антибиотика, растворенного в дайной среде. Добавляют расплавленный агар, чашки охлаждают, чтобы агар затвердел. На поверхности среды штрихом засевают культуры одной или нескольких бактерий и после инкубации в термостате в течение необходимого времени определяют минимальную концентрацию антибиотика, при которой подавляется рост бактерий. Одним из преимуществ этого метода перед методом титрования в жидкой среде является то, что разные участки одной и той же чашки можно засевать разными видами или штаммами бактерий. В результате величины МПК для нескольких бактерий можно определить в одном опыте (рис. 2.2).

1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ АНТИБИОТИКОВ

МЕТОДОМ ДИФФУЗИИ В АГАРЕ
Этот метод применяется для определения концентрации антибиотика в растворе. Он состоит в следующем. Диски из фильтровальной бумаги, смоченные исследуемым раствором антибиотика, помещают на поверхность агаризованной среды, содержащей разведенную суспензию бактерий. После соответствующей инкубации поверхность агара, которая вначале была полупрозрачной, мутнеет из-за рассеяния света выросшими бактериями. Полупрозрачные зоны остаются лишь вокруг дисков фильтровальной бумаги, поскольку антибиотик диффундирует в агар и подавляет рост бактерий. Если диаметр этих зон определять при строго стандартных условиях, то он будет функцией логарифма концентрации антибиотика. Используя известные концентрации антибиотика, строят стандартную кривую, по которой можно определить концентрацию антибиотика в неизвестных растворах (рис. 2.3). Иногда вместо дисков из фильтровальной бумаги используют небольшие полые цилиндрики, поставленные на поверхность агаровой среды и содержащие раствор антибиотика.

1. ФАКТОРЫ, ВЛИЯЮЩИЕ НА ОПРЕДЕЛЕНИЕ

АКТИВНОСТИ АНТИБИОТИКОВ
Активность антибиотиков in vitro зависит от условий определения (табл. 2.1). На определение активности влияют такие факторы, как состав среды, плотность инокулума, количество бактериальных клеток в иноку луме (величина инокулума).

/

Таблица 2.1. Факторы, влияющие на определение активности антибиотиков
Тест-организм
Состав среды (pH, ионы, сыворотка, антагонисты)
Величина и плотность инокулума (гетерогенность популяции, механизмы инактивации, попадание веществ-антагонистов)
Условия инкубации (время, температура, аэрация)
А. СОСТАВ СРЕДЫ
Рассмотрим в качестве примера антибиотик, подавляющий биосинтез одной из аминокислот. Если антибиотик испытывают в среде без этой аминокислоты, то кажется, что он обладает очень высокой активностью, другими словами, имеет низкую величину МПК. При испытании в "среде, содержащей аминокислоту, синтез которой он подавляет и которую бактерия может получать из среды, антибиотик будет казаться неактивным.
Помимо таких специфических эффектов часто наблюдается менее специфическое влияние среды, не связанное непосредственно с механизмом действия или с химической структурой антибиотика. Одним особенно интересным случаем является наличие в среде сыворотки. Ее вводят в среду при определении МПК, чтобы создать физиологические условия, напоминающие условия в крови. Многие антибиотики связываются с белками сыворотки крови (в особенности с альбумином), в результате число свободных молекул антибиотика, которые могут проникать в бактериальные клетки, снижается. Связывание антибиотика с белками сыворотки обычно коррелирует с липофильностью некоторых заместителей в его молекуле.
Очевидно, что условия определения МПК в жидкой среде отличаются от условий в плотной среде хотя бы потому, что в плотной среде присутствует агар. Агар, содержащий S03-rpyn- пы, может адсорбировать антибиотик, изменяя его диффундирующую способность, или адсорбировать растворенный кислород и некоторые компоненты питательной среды. Неудивительно поэтому, что величина МПК антибиотика в отношении данной бактерии зависит от того, определена ли она в жидкой или в плотной среде, даже если эти две среды, за исключением наличия или отсутствия агара, идентичны по составу. Нужно также помнить, что физиология клеток может различаться в зависимости от того, растут ли они поодиночке в жидкости или в виде колоний на поверхности плотной среды.
Очень сильное влияние на активность антибиотиков оказывает величина pH среды. Помимо второстепенных эффектов, как то влияние pH на скорость роста микроорганизмов и, следова-
тешыно, косвенное влияние на их восприимчивость, величина pH оказывает очень сильное и непосредственное действие на способность препарата проникать,в бактериальную клетку. Например, вещества в неионизированной форме лучше диффундируют через клеточную стейку и плазматическую мембрану, чем вещества в ионизированной форме. Таким образом, pH среды, определяя степень ионизации основного или.кислого антибиотика, может прямо влиять на скорость его проникновения в бактерии и, следовательно, на эффективность.
Б. ПЛОТНОСТЬ И ВЕЛИЧИНА БАКТЕРИАЛЬНОГО ИНОКУЛУМА
Плотность инокулума - это число засеваемых бактерий, отнесенное к объему, в котором они растут. Ее обычно выражают как число клеток в 1 мл культуры. Величина инокулума - общее число засеянных бактерий. На МПК многих антибиотиков не влияют вариации в плотности обычно используемого инокулума (103-106 бактерия/мл). Действительно, даже при очень низких концентрациях антибиотика, например 0,01 мкг/мл, отношение числа молекул антибиотика к числу бактериальных клеток остается очень большим (при концентрации антибиотика с мол. массой 1000, равной 0,01 мкг/мл, в 1 мл раствора содержится ~1012 молекул). Однако имеются некоторые исключения. Например, зачастую очень много молекул антибиотика адсорбируется на наружной поверхности бактериальной клетки. Если плотность бактерий высока, число свободных молекул антибиотика, которые могут проникнуть в клетку, очень сильно снижается. Кроме того, для подавления роста одной клетки часто бывает необходимо большое количество молекул антибиотика. По мере роста бактерии синтезируют и выделяют в среду ферменты, которые могут разрушать антибиотик (например, р-лакта- мазы, действующие на р-лактамные антибиотики; см. гл. 4). Количество разрушенного антибиотика является функцией концентрации фермента в питательной среде и, следовательно, зависит от величины инокулума.
На первый взгляд кажется, что, если плотность культуры бактерий одинакова, не важно, исследуется ли активность антибиотика в маленьких объемах, например 0,25 мл и меньше в миниатюризованных системах, или в объеме 10 мл в обычных лабораторных пробирках. Если все бактерии в популяции идентичны, никакой разницы в результатах не будет.
Когда общее число бактерий в инокулуме очень велико, повышается вероятность того, что в среде будут присутствовать клетки, менее восприимчивые к антибиотику. Рост всех восприимчивых клеток будет подавлен, однако менее восприимчивые (в принципе это может быть даже единственная клетка) будут размножаться, и после инкубации в течение 18 ч образуется по-

Таблица 2.2. Факторы, влияющие на активность некоторых антибиотиков

пуляция бактерий с высокой плотностью. Значительная вариабельность величины МПК с изменением числа инокулирован- ных клеток обычно свидетельствует о высокой частоте мутантов, устойчивых к антибиотику (гл. 4). Частота появления устойчивых мутантов неодинакова для разных антибиотиков. В случае антибиотиков, используемых в клинике, она колеблется от 10~7 до 10-10.
В этом разделе описаны далеко не все факторы, которые могут влиять на активность антибиотика в отношении определенной бактерии (табл. 2.2). Поэтому, чтобы использовать подавление роста бактерий для количественного определения активности антибиотиков и получить данные, которые можно воспроизвести в разных лабораториях, необходимо, чтобы все условия были точно определены и по возможности стандартизованы.

Наименование веществ	Уровень порогового значения (нг/мл)
Группа амфетаминов
Амфетамин
Метамфетамин
Метилендиоксиамфетамин (МДА)
Другие вещества амфетаминовой группы
Группа опиатов
Морфин
Кодеин
6-моноацетилморфин
Группа бензодиазепинов
Оксазепам
Диазепам
Нордиазепам
Мидазолам
Феназепам
Другие вещества группы бензодиазепина
Группа барбитуратов
Барбамил
Этаминал натрия
Химические вещества других групп
11-нор-Δ 9 -тетрагидроканнабиноловая кислота (основной метаболит Δ 9 -тетра-гидроканнабинола)
Кокаин и его метаболиты
Метадон и его метаболиты
Пропоксифен и его метаболиты
Бупренорфин и его метаболиты
d-Лизергид (ЛСД, ЛСД-25)
Фентанил и его метаболиты
Метаквалон
Фенциклидин

Таблица 2 приложения к Порядку проведения медицинского освидетельствования на состояние опьянения (алкогольного, наркотического или иного токсического) , утвержденному приказом Министерства здравоохранения Российской Федерации (проект), "Уровни пороговых значений содержания наркотических средств, психотропных веществ, иных химических веществ и их метаболитов, определяемые методами подтверждающего анализа ".

Примечание: уровень порогового значения – это минимальная концентрация вещества (его метаболита) в биологическом объекте, определяемая методами предварительного или подтверждающего анализа, при выявлении которой результат исследования считается положительным.

Фактически аналогичная таблица под названием "Уровни порогового значения для подтверждающих методов анализа при исследовании мочи " приведена в Центральной химико-токсикологическая лаборатория при кафедре аналитической и судебно-медицинской токсикологии Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования Первый Московский государственный медицинский университет имени И. М. Сеченова (ЦХТЛ ГОУ ВПО Первый МГМУ им. И. М. Сеченова) Министерства здравоохранения Российской Федерации от 30 августа 2011 года № 179-25/12И, где, однако, кроме всего прочего указаны концентрации фенобарбитала (1" 000 нг/мл), других веществ из группы барбитуратов (100 нг/мл) и котинина (100 нг/мл). Согласно данному ЦХТЛ ГОУ ВПО Первый МГМУ им. И. М. Сеченова, в соответствии с пунктом 2 приказа Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации от 27.01.2006 года № 40 "Об организации проведения химико-токсикологических исследований при аналитической диагностике наличия в организме человека алкоголя, наркотических средств, психотропных и других токсических веществ", разработала и утвердила требования к проведению химико-токсикологических исследований при аналитической диагностике наличия в организме человека наркотических средств, психотропных и других токсических веществ".

В частности, согласно пункту 12 информационного письма при проведении медицинского освидетельствования водителей транспортных средств, тестировании учащихся, проведении химико-токсикологических исследований при обращении граждан и иных случаях, установленных законодательством, исследование жидкости ротовой полости (слюны) недопустимо, так как не позволяет достоверно установить факт наличия в организме человека наркотических средств, психотропных и других токсических веществ. Контролируемые вещества могут быть определены в жидкости ротовой полости (слюне) во временном интервале, не превышающем нескольких часов с момента употребления.

Требования к техническим средствам, применяемым с целью обнаружения наркотических средств, психотропных и иных токсических веществ (их метаболитов) в образцах мочи, при проведении предварительных химико-токсикологических исследованиях (приложение № 1 к Методическим рекомендациям: Правила проведения химико-токсикологических исследований на предмет наличия в организме обучающихся в общеобразовательных организациях и профессиональных образовательных организациях, а также образовательных организациях высшего образования в целях раннего выявления незаконного потребления наркотических средств и психотропных веществ наркотических средств, психотропных и иных токсических веществ (их метаболитов) / Разработчик: Ассоциация специалистов и организаций лабораторной службы «Федерация лабораторной медицины» под редакцией главного внештатного специалиста по аналитической и судебно-медицинской токсикологии Минздрава России, д.х.н., профессора Б.Н. Изотова и главного внештатного специалиста по клинической лабораторной диагностике Минздрава России, д.м.н., профессора А. Г. Кочетова // Москва, 2015)

Наименование групп веществ	Концентрация (нг/мл)
Опиаты (6 моноацетилморфин, морфин, кодеин, дезоморфин и др.)
Каннабиноиды
Фенилалкиламины (амфетамин, метамфетамин, мефедрон и др.)
Метадон
Бензодиазепины
МДМА
Кокаин
Барбитураты
Котинин
Синтетические каннабиноиды
Катиноны
Этилглюкуронид

Требования к техническим средствам, применяемым с целью обнаружения наркотических средств, психотропных и иных токсических веществ (их метаболитов) в образцах мочи, при проведении подтверждающих химико-токсикологических исследований (приложение № 2 к указанному выше источнику)

Наименование групп веществ	Концентрация (нг/мл)
Группа амфетамина
Амфетамин
Метамфетамин
Метилендиоксиамфетамин (МДА)
Метилендиоксиметамфетамин (МДМА)
Другие вещества амфетаминовой группы
Группа опиатов
Морфин
Кодеин
6-моноацетилморфин
Другие вещества опийной группы
Группа бензодиазепина
Оксазепам
Диазепам
Нордиазепам
Мидазолам
Феназепам
Другие вещества группы бензодиазепина
Группа барбитуратов
Фенобарбитал	1000
Барбамил
Этаминал натрия
Другие вещества группы барбитуратов
Вещества других групп
11-нор-Δ9-тетрагидроканнабиноловая кислота (основной метаболит Δ9-тетра-гидроканнабинола)
Бензоилэкгонин (метаболит кокаина)
Метадон
Пропоксифен
Бупренорфин
ЛСД
Фентанил
Метаквалон
Фенциклидин
Котинин
Синтетические каннабиноиды
Катиноны
Этилглюкуронид

Вместе с тем, при осуществлении защиты по делам об административных правонарушениях по статьям 12.8 и 12.27 часть 3 КоАП РФ, а также по делам, предусматривающим уголовную ответственность при управлении транспортным средством в состоянии опьянения (статьи 264 и 264.1 УК РФ), не следует забывать, что административная ответственность наступает в случае наличия наркотических средств или психотропных веществ в организме человека вне зависимости от их концентрации в организме человека, в крови и в моче.

В силу изложенного выявление в рамках проведения наркологических экспертиз, химико-токсикологических исследований, судебно-химических исследований наркотических средств, психотропных и токсических веществ, и веществ, вызывающих опьянение, даже на уровне, так сказать, "предела обнаружения используемого метода" является основанием для привлечения водителя транспортного средства к административной или уголовной ответственности по соответствующим статьям Кодекса РФ об административных правонарушениях и/или Уголовного кодекса РФ.

Для информации - " "

Критериями антимикробной активности препарата являются минимальная подавляющая концентрация (МПК) и минимальная бактерицидная концентрация (МБК). МПК – это наименьшая концентрация антибиотиков, которая in vitro полностью подавляет видимый рост бактерий. Она выражается в мг/л или мкг/мл. МБК – это наименьшая концентрация антибиотика, которая вызывает бактерицидный эффект. Для её определения необходимо провести высев из пробирок (визуально отсутствует рост) на плотный питательный агар, не содержащий антибиотик. Этот показатель имеет большое клиническое значение. На основе метода серийных разведений созданы микрометоды, предусматривающие использование меньшего объёма питательной среды. В настоящее время для проведения такого рода исследований выпускаются многочисленные коммерческие наборы, состоящие из высушенных стабилизированных разведений антибиотиков, которые разбавляются суспензией тест-микроба. Данные наборы могут храниться в обычных условиях, вследствие чего исключается необходимость в приготовлении разведений среды и антибиотиков в лабораторных условиях. Достоинством тестов микроразведений является также то, что они включаются в автоматизированную систему.

На основании полученных данных (диаметра зоны задержки роста или величины МПК) микроорганизмы подразделяют на чувствительные, умеренно-резистентные и резистентные. Для разграничения этих категорий используют так называемые пограничные концентрации антибиотиков, которые не являются неизменными величинами. Они пересматриваются по мере изменения чувствительности популяции микроорганизмов. Разработкой и пересмотром критериев интерпретации занимаются ведущие специалисты (химиотерапевты, микробиологи), входящие в специальные комитеты. Одним из них является национальный комитет по клиническим лабораторным стандартам (N ational C ommittee for C linical L aboratory S tandards – NCCLS), организованный в США. В настоящее время стандарты NCCLS используются как международные для оценки результатов определения чувствительности бактерий при многоцентровых микробиологических и клинических исследованиях.

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам

Критерием чувствительности микроорганизмов к антибиотикам является минимальная подавляющая концентрация (МПК) или минимальная ингибирующая концентрация (МИК) антибиотика, задерживающая рост возбудителя при стандартных условиях постановки опыта.

Для определения лекарственной устойчивости используют суточную чистую культуру возбудителя, выделенную из организма больного, и стандартную питательную среду (АГВ или Мюллер-Хинтон агар) для её посева.

Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам проводят диско-диффузионным методом или методом серийных разведений антибиотика в жидких или плотных средах.

Диско-диффузионный метод

Определение чувствительности к антибиотикам методом бумажных дисков основано на диффузии антибиотика в питательную среду. Концентрация антибиотиков в дисках подобрана таким образом, чтобы диаметры зон задержки роста стандартных тест-микроорганизмов соответствовали международным стандартам. Эта концентрация соответствует средней терапевтической дозе для стандартных штаммов микроорганизмов.

Приготовленную взвесь микроорганизмов засевают на поверхность специальной среды (АГВ или агар Мюллер-Хинтона) в чашки Петри. Затем стерильным пинцетом на засеянную поверхность помещают на равном расстоянии друг от друга, от краев и центра чашки стандартные бумажные диски, пропитанные растворами различных антибиотиков (также можно использовать специальные устройства и диспенсеры). Засеянные чашки выдерживают в термостате при температуре, оптимальной для роста исследуемых бактерий. Если бактерии чувствительны к данному антибиотику, то вокруг диска образуется зона задержки роста. Диаметр зоны задержки роста соответствует степени чувствительности исследуемого микроорганизма к данному антибиотику. Окончательный результат оценивается по специальным таблицам, в которых указаны диаметры зон задержки роста стандартных культур, чувствительных, устойчивых и умеренно-устойчивых.

Метод дисков не даёт надежных данных при определении чувствительности микроорганизмов к плохо диффундирующим в агар полипептидным антибиотикам (например, полимиксину, ристомицину). Также этот метод не позволяет определить минимальную подавляющую концентрацию антибиотика.